ブックタイトル日本結晶学会誌Vol57No2

概要

日本結晶学会誌Vol57No2

Cas9の結晶構造REC2HNH domaindomainCleavage siteREC1domainRepeatREC lobeGuide:targetheteroduplexAnti-repeatTetraloopGuideTargetNUC lobeRuvCdomainPIdomain180°180°BridgehelixREC2domainREC1domainREC lobeStem loop 1PIdomainStem loop 2Stem loop 3RuvCdomainREC?NUC linkerNUC lobe図4Cas9-sgRNA-相補鎖DNA三者複合体の結晶構造．（Crystal structure of the Cas9-sgRNA-target DNA ternarycomplex.）リボン表示（左図）と分子表面表示（右図）を示した．酵素活性部位を丸で囲んだ（左図）．HNHドメインは削除した（右図）．構造の図はCueMol（http://www.cuemol.org/）のradiosity renderingを用いて作製した．Guide:targetheteroduplexRepeat:anti-repeatduplexGuide:targetheteroduplexRepeat:anti-repeatduplexAnti-repeatAnti-repeatTargetTarget3′5′Guide5′RepeatTetraloop3′5′Guide5′RepeatTetraloopStem loop 2Stem loop 1Stem loop 2Stem loop 13′Stem loop 33′Stemloop3図5 sgRNA-標的DNA（ステレオ図）．（sgRNA-target DNA.）らかになった（図4）．2つのローブをRECローブ（REC：recognition）とNUCローブ（NUC：nuclease）と名づけた．RECローブは，アルギニン残基に富むαヘリックス（ブリッジヘリックスと名づけた），REC1ドメイン，REC2ドメインから構成されていた．NUCローブはRuvCドメイン，HNHドメイン，PIドメイン（PI：PAM-日本結晶学会誌第57巻第2号（2015）interacting）から構成されていた．一次構造において離れて存在する3つのRuvCモチーフ（RuvC-I～RuvC-III）が集合し，1つのRuvCドメインを形成していた．RuvCドメインとPIドメインは密接に相互作用していた一方，HNHドメインはほかのドメインとほとんど相互作用していなかった．HNHドメインは相補鎖DNAの切断部位99